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Date d'inscription : 21/09/2006

MessageSujet: I   Lun 22 Oct - 9:04

I.T.C. (bouillon à l’irgasan, à la ticarcilline et au chlorate de potassium)



Ce milieu est préconisé comme milieu d’enrichissement ( au même titre que le PSB) dans la norme NF V 08-027 (ISO 10273) relative aux directives générales pour la recherche des Yersinia enterolitica présumées pathogènes.


FORMULE (en g/l d’eau distillée)


1) milieu de base

Tryptone : 10
Extrait de levure: 1
Magnésium chlorure hexahydraté: 60
Sodium chlorure: 5
Vert malachite, sol. Aqueuse à 0,2% 5 ml
pH= 6.9


Dissoudre les composants dans l’eau, en chauffant si nécessaire.
Répartir dans des flacons de capacité appropriée, pour obtenir les quantités nécessaires de milieu complet

2) solution de ticarcilline
Ticarcilline 10 mg
Eau 10 ml

Dissoudre la ticarcilline dans l’eau.
Stériliser par filtration.

3) solution alcoolique d’irgasan
Irgasan 10 mg
Ethanol à 95°(V/V) 10 ml

Dissoudre l’irgasan dans l’éthanol extemporanément sinon, conserver la solution à environ –20°C pendant 4 semaines au maximum.

4) solution de chlorate de potassium
Chlorate de potassium 10 g
Eau 100 ml

Dissoudre le chlorate de potassium dans l’eau.
Stériliser par filtration.

5) Milieu complet
Milieu de base: 988 ml
Solution de ticarcilline : 1 ml
Solution d’irgasan: 1 ml
Solution de chlorate de potassium : 10 ml

Juste avant emploi, ajouter stérilement au milieu de base refroidi à environ 45°C, les solutions de ticarcilline, d’irgasan et de chlorate de potassium et mélanger.

Répartir stérilement le milieu par quantités de 10 ml dans des tubes stériles ou de 100 ml dans des flacons stériles de capacité appropriée de manière à obtenir un rapport surface/volume minimum (anaérobie relative).


UTILISATION ET LECTURE

Pour préparer la première suspension initiale, introduire une quantité x de prise d’essai (masse ou volume) dans un volume connu de bouillon ITC de façon à obtenir un rapport prise d’essai/milieu d’enrichissement de 1/10). Homogénéiser la suspension en utilisant un homogénéisateur péristaltique.

Préparer la deuxième suspension initiale, en opérant de la même façon avec le bouillon PSB.

Incuber les deux suspensions initiales de la façon suivantes :

- Milieu ITC à 25 °C pendant 48 heures

- Milieu PSB à 22°C ou à 25°C pendant 48 heures à 72 heures avec agitation ou pendant 5 jours sans agitation.

A l’issue de l’incubation les milieux d’enrichissement serviront pour l’isolement et l’identification des Yersinia enterolitica présumées pathogènes.
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